Е.И. Кравцова, кандидат медицинских наук, Н.В. Колесникова, доктор биологических наук, Б.Г. Ермошенко, доктор медицинских наук, Г.А. Чудилова, кандидат биологических наук, Т.А. Лузум, кандидат медицинских наук Кафедра акушерства и гинекологии, кафедра аллергологии, иммунологии и лабораторной диагностики ФПК ППС Кубанская государственная медицинская академия, г. Краснодар

Получены данные, свидетельствующие об усилении экспрессии активационных маркеров нейтрофильных гранулоцитов на фоне достоверного возрастания общего количества клеток гранулоцитарного ряда при физиологической беременности, тогда как при беременности, осложненной гестозами, наблюдается их гиперактивация (при гестозе легкой степени) с признаками истощения функциональных возможностей при гестозе средней степени и выраженной депрессией при гестозе тяжелой степени. При этом наиболее значимыми диагностическими маркерами поздних тяжелых гестозов беременных следует считать выраженную депрессию количества CD25(+)- и CD95(+)-НГ, а также 1,5-кратное возрастание индекса отношения лейкоцитов, обусловленное депрессией количества лимфоцитов периферической крови.

Многочисленные исследования различных авторов показывают, что состояние плода и здоровье новорожденного во многом определяются характером течения гестационного процесса и состоянием иммунной системы женщины во время беременности [1–3].

Традиционные взгляды на беременность не только как на иммуносупрессивное, но даже как на иммунодефицитное состояние все еще широко распространены. Между тем при физиологическом течении беременности не только не отмечается склонности к развитию инфекционных и воспалительных заболеваний, но и затухают многие хронические воспалительные процессы, в том числе и в органах малого таза [4]. Более того, остаются необъясненными такие важные изменения в иммунной системе беременных, как выраженная лейкоцитарная реакция на границе трофобласта и децидуальной оболочки плаценты, а также нейтрофилез и моноцитоз в периферической крови [4]. Вместе с тем известно, что ведущими звеньями патогенеза гестоза считают нарушения адаптационных, в том числе иммунных, механизмов в виде снижения общего пула Т-лимфоцитов, Т-хелперов, Т-супрессоров, В-лимфоцитов и их активной фракции, повышения уровня ЦИК и снижения иммуноглобулина G (IgG) [5], что создает благоприятные условия для развития аллергических состояний и аутоиммунных реакций, ведет к развитию симптомокомплекса гестоза беременных.

Исходя из того, что при беременности в норме супрессия специфического звена иммунной системы не просто сопровождается, но и компенсируется активацией системы неспецифического иммунитета [4], представляет интерес состояние функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов (НГ) при поздних гестозах в зависимости от степени тяжести последних как первой "аварийной" линии защиты в системе надзора за иммунным гомеостазом [6]. По своему физиологическому потенциалу НГ могут рассматриваться как популяция клеток, обладающая уникальными адаптационными возможностями, широко реализующимися в норме и на фоне развития патологических процессов [7].

Цель работы – на основании количественной оценки различных функционально значимых субпопуляций НГ, а также нейтрофильно-лимфоцитарного отношения в периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и с ее осложненным течением выявить наиболее значимые диагностические критерии степени тяжести поздних гестозов беременных.

Материалы и методы исследования

Исследования проведены с использованием венозной и капиллярной крови 132 беременных, не имеющих в анамнезе острых и хронических тяжело протекающих заболеваний внутренних органов, при сроках 28-36 нед. беременности, однократно, независимо от планового проведения профилактики гестоза или получаемого лечения. Группу сравнения составили 50 небеременных женщин репродуктивного возраста. Тяжесть гестоза определяли по шкале Гоека в модификации Г.М. Савельевой (1996). Это позволило по сумме баллов определить в момент осмотра беременных гестоз легкой степени (7 баллов и менее), гестоз средней степени тяжести (8–11 баллов), тяжелый гестоз (12 баллов и более) и сформировать следующие клинические группы обследуемых:

I группа (контроль 1) – небеременные женщины репродуктивного возраста (НБ);

II группа (контроль 2) – женщины с физиологически протекающей беременностью (ФБ);

III группа – беременные женщины с гестозом легкой степени (ГЛС);

IV группа – беременные с гестозом средней степени тяжести (ГСС);

V группа – беременные с гестозом тяжелой степени (ГТС).

Оценку субпопуляций НГ периферической крови у женщин указанных групп осуществляли в реакции непрямой иммунофлюоресценции [8] с использованием моноклональных антител со специфичностью к основным функционально значимым рецепторам НГ: адгезии (CD11b); цитотоксичности (CD16); позитивной активации (проапоптические) (CD95); а также рецепторам к интерлейкину-2 (CD25). Наряду с этим определяли общее количество лейкоцитов крови и долю среди них НГ и лимфоцитов (в процентном и абсолютном выражении) с целью расчета индекса отношения лейкоцитов (ИОЛ) как частного от деления уровня содержания НГ на количество лимфоцитов периферической крови. Полученные результаты подвергали адекватной статистической обработке с использованием T-критерия Стьюдента.

Результаты исследования

Исследованиями показано (рис. 1), что у женщин с ФБ имеет место достоверное возрастание общего количества лейкоцитов (6153,14 ± 102,58 против 4800,23 ± 243,23 в контроле 1). Осложнение беременности ГЛС и ГСС сопровождалось дальнейшим возрастанием данного показателя, тогда как при ГТС отмечалось резкое снижение уровня содержания лейкоцитов крови (5687,35 ± 121,45 против 7060,54 ± 193,32 при ГСС и против 6848,24 ± 134,52 при ГЛС). Сходный характер изменений наблюдался в отношении как абсолютного, так и относительного содержания НГ в сравниваемых группах (рис. 1), что свидетельствует о прямой зависимости данных параметров. Между тем относительное содержание лимфоцитов при ФБ уменьшалось (24,12 ± 2,23 против 30,00 ± 7,45 у НБ), однако имеющее место увеличение лейкоцитоза при ФБ не позволило выявить сходное снижение данного показателя в абсолютном его выражении (рис. 1). При ГЛС содержание лимфоцитов в периферической крови было максимальным (1644,32 ± 152,32) с тенденцией к снижению относительной величины лимфоцитов (23,00 ± 2,34). При беременности, осложненной ГСС, в лейкоформуле крови были выявлены сходные изменения содержания лимфоцитов, в то время как при ГТС этот показатель был минимальным и в процентном (16,21 ± 1,64), и в абсолютном выражении (924,26 ± 94,82). Расчет ИОЛ (рис. 2) показал, что в норме у НБ он составляет 1,90 ± 0,23, а при ФБ имеет место его достоверное (p<0,01) возрастание до 2,64 ± 0,36 с дальнейшим возрастанием при ГЛС (2,83 ± 0,47) и ГСС (2,87 ± 0,21). Однако при ГТС мы наблюдали максимальное увеличение ИОЛ (4,43 ± 0,47), обусловленное резким снижением доли лимфоцитов среди лейкоцитов периферической крови.

Изучение рецепторной функции НГ (рис. 3) показало, что при ФБ происходит достоверное возрастание абсолютного содержания способных к рецепторозависимой адгезии клеток (CD11b(+)-НГ) в 2,5 раза ( до 977,24 ± 77,57), тогда как при ГЛС и ГСС отмечается возрастание их количества в 3,3 раза (до 1182,75 ± 59,32 и до 964,40 ± 16,30 соответственно). Между тем при ГТС имело место достоверное (p<0,01) снижение НГ, экспрессирующих данный рецептор (593,10 ± 69,14 против 977,24 ± 77,57 в контроле 2), что может быть следствием функциональной истощенности клеток. Так как уровень провоспалительных цитокинов при гестозах возрастает [9], то одной из возможных причин стимуляции количества CD11b(+)-НГ и адгезивной способности НГ в сравниваемых группах может быть высокое содержание в плазме крови ИЛ-1 и ФНО, вызывающих экспрессию молекул адгезии на эндотелии и НГ [10].

Изменение количества цитотоксических CD16(+)-НГ имело несколько иной характер (рис. 3). В частности, при ФБ наблюдалось их достоверное увеличение (894,31 ± 56,53 против 401,00 ± 31,00 в контроле), при ГЛС – трехкратное увеличение (p<0,01), при ГСС – дальнейшее возрастание, а при ГТС – достоверное снижение количества CD16(+)-НГ (616,10 ± 45,40). На наш взгляд, это может быть обусловлено усиленной миграцией коммитированных НГ в зону антигенной стимуляции (децидуальная оболочка плаценты) либо истощением адаптивно-приспособительных механизмов иммунной системы беременных с тяжелым гестозом.

Оценка количества НГ, имеющих рецепторы к ИЛ-2 (CD25-рецепторы) при ФБ, не позволила выявить достоверных отличий от таковых у НБ. Между тем при ГЛС отмечалось достоверное увеличение количества CD25(+)-НГ (1129,00 ± 95,08 против 815,02 ± 60,64), при ГСС имела место тенденция к снижению количества НГ, несущих рецепторы к ИЛ-2, а при ГТС – достоверная (р<0,01) депрессия CD25(+)-НГ относительно всех групп сравнения (436,95 ± 83,38). Это позволяет предполагать, что при тяжелом гестозе не только угнетается продукция ИЛ-2, играющего существенную роль в контроле иммунных взаимоотношений матери и плода [11], но и резко редуцируется субпопуляция НГ, экспрессирующих рецепторы к нему.

Количество НГ, несущих проапоптические CD95-антигены при беременности в норме (рис. 3), достоверное возрастает (818,51 ± 109,24 против 246,20 ± 0,21 в контроле) с еще более выраженным их ростом при ГЛС (976,00 ± 85,54 против 246,2 ± 0,21; р<0,01). Однако при ГСС количество CD95(+)-НГ было снижено (818,83 ± 19,30) до уровня такового при ФБ, тогда как при ГТС содержание в периферическом кровотоке активированных проапоптических клеток достоверно и выраженно уменьшалось (270,61 ± 61,09) и не отличалось от такового у НБ.

Полученные данные в целом свидетельствуют об усилении экспрессии активационных маркеров НГ на фоне достоверного возрастания общего количества клеток гранулоцитарного ряда при ФБ, тогда как при беременности, осложненной гестозами, наблюдается напряженность функционирования НГ на системном уровне, обусловленная преимущественной их гиперактивацией (при ГЛС) с признаками истощенности резервных и функциональных возможностей при ГСС и выраженной депрессией функционирования НГ при ГТС. При этом наиболее значимыми диагностическими маркерами поздних тяжелых гестозов беременных следует считать выраженную депрессию количества CD25(+)- и CD95(+)-НГ, а также 1,5-кратное возрастание ИОЛ, обусловленное депрессией количества лимфоцитов периферической крови.

Проведенные исследования соответствуют литературным данным о возникновении при нормальном течении гестационного процесса равновесного состояния между специфическим и неспецифическим иммунитетом матери, при котором центральной клеткой иммунной адаптации матери становится не лимфоцит [4]. Наблюдаемая активация НГ при ФБ имеет несомненное патогенетическое значение, в то время как возможной причиной аутоиммунной агрессии при гестозах, особенно ГТС, являются дисбаланс звеньев специфической и неспецифической иммунной защиты и признаки истощения функциональных возможностей клеток.

Список литературы

1. Анциферова Ю.С. Иммуномодулирующее действие нейтрофилов и их роль при беременности // Автореф. дисс. … канд. биол. наук. НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова. М., 1996. С. 19.
2. Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С. Крошкина Н.В. и др. Участие в процессе активации лимфоцитов факторов, продуцируемых нейтрофилами женщин с физиологической беременностью и с беременностью, осложненной поздним ОПГ-гестозом // Клиническая лаб. диагностика. 1998. № 6. С. 51–54.
3. Sargent H.J. Erythrocyte glutatione balance and membrane stability during preeclampsia // Free Pradic. Biol. Med. 1998. V. 24. № 6. P. 1049–1055.
4. Гузов И.И. Иммунобиология и иммунопатология беременности. М.: Центр иммунологии и репродукции, 2003.
5. Кустаров В.И., Линде В.А. Гестоз: патогенез, симптоматика, лечение. СПб.: Гиппократ, 2000. 114 с.
6. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск, 1989. 256 с.
7. Barbara H., Klempner M.S., Gallin J.J. Antimicrobial mechanisms in neutrophilic polymorphonuclear leucocytes // Semin Hemat. 1983. № 12. P.117–142.
8. Филатов А.В., Бачурин П.С. и др. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов человека с помощью панели моноклональных антител // Гематология и трансфузиология. 1990. Т. 35. № 4. С.16–19.
9. Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Крошкина Н.В., Кудряшева А.Н. Иммуномодуляция и иммунорегуляция на системном и локальном уровне при беременности. // Медицинская иммунология. Москва, 2001. Т. 3. С. 259.
10. Thomsen M.K. Is interleukin-1b a direct activator of neutrophil migration and phagocytosis in the dog? // Agents and Actions. 1990. V.29. № 1-2. P. 35–36.
11. Астраух Н.В., Сотникова Н.Ю., Крошкина Н.В. Особенности процессов активации и продукции регуляторных цитокинов на локальном уровне при гестозе // Медицинская иммунология. М., 2001. Т.3. С. 249.