Микроорганизмы класса Моllicutes, предками которых являются клостридии, стали предметом изучения сравнительно недавно. Их происхождение связано с делецией генов и значительным уменьшением генома, что делает микоплазмы зависимыми от организма хозяина и требовательными к питательным средам. Класс Моllicutes содержит 5 родов - Мусорlаsmа, Ureaplasma, Acholeplasma, Anaeroplasma, Asteroplasma. Большинство изученных видов относится к роду Мycoplasma. В организме человека вегетируют 16 видов микоплазм, из них для 6 видов местом обитания являются слизистые оболочки гениталий (табл.6).

Места первичной локализации и возможность метаболизма глюкозы и аргинина у микоплазм человека
(Тауlor-Robinson D. et all., 1999)

Виды	Год выделения	Первичное место колонизации		Метаболизм глюкозы	Метаболизм аргинина
		Рот и глотка	Урогениталии
М. hominis	1973	нет	да	-	+
М. fermentans	1952	да (?)	нет(?)	+	+
М. salivarium	1953	да	нет	-	+
U. urealyticum*	1954	нет	да	-	-
М. primatum	1955	нет (?)	да	-	+
М. pneuoniae	1962	да	нет	+	-
А. laidlawii	1964	да	нет	+	-
М. orale	1904	да	нет	-	+
М. buccale	1965	да	нет	-	+
М. pirum	1968	?	?	+	+
М. faucium	1969	да	нет	-	+
М. lipophilum	1974	да	нет	-	+
М. genitalium	1981	нет	да	+	-
А. oculi	1987	?	?	-	-
М. spermatophilum	1991	нет	да	-	+
М. penetrans	1991	нет	да	+	+

Примечание: * метаболизирует мочевину.

Вследствие возможных орогенитальных контактов генитальные микоплазмы могут быть обнаружены в полости рта и в глотке, а орофaрингиальные виды - в половом тракте. Наиболее часто из гениталий выделяют U.urealyticum и М.hominis, которые хорошо растут на специальных питательных средах. М.genitalium относится к трудно культивируемым видам, для ее обнаружения требуется применение полимеразной цепной реакции или других молекулярно-биологических методов.

Эпидемиология

Колонизация новорожденных и детей раннего возраста

Новорожденные дети, приобретают микоплазмы, проходя через родовые пути матери. U.urealyticum и М.hominis могут быть выделены из полости рта, носа, глотки, гениталий и мочи новорожденных, чаще у девочек, чем у мальчиков. Колонизация новорожденных и детей раннего возраста транзиторна и исчезает довольно быстро, но у 5-20% детей сохраняется и в препубертатиом периоде.

Колонизация взрослых

Передача генитальных микоплазм происходит при половом контакте, поэтому колонизация ими гениталий зависит от числа половых партнеров и характера половых связей. Считается, что колонизация у женщин встречается чаще, чем у мужчин; колонизация U.urealyticum встречается в 2-3 раза чаще, чем колонизация М.hominis.

Роль генитальных микоплазм в заболеваниях урогенитального тракта у мужчин

Хотя микоплазмы и уреаплазмы часто находят в уретре мужчин, страдающих негонококковым уретритом, их роль в этиологии заболевания все еще остается спорной. Считается, что U.urealyticum причастна к возникновению уретрита, если микроорганизм присутствует в уретре в высоких концентрациях в течение длительного времени. Лечение антибиотиками коррелирует с клиническим выздоровлением и исчезновением уреаплазм из мочи.

В пользу этиологической роли U.urealyticum при негонококковых уретритах свидетельствуют опыты самозаражения исследователей свежевыделенными от больных уретритами штаммами U.urealyticum, а также заражение добровольцев. В этих опытах показано возникновение воспалительного процесса в уретре и появление М-антител к U.urealyticum у подопытных лиц.

Ряд исследователей полагает, что лишь некоторые серовары U.urealyticum, например, серовар 4, вызывают негонококковый уретрит. Во всяком случае ясно, что не следует любое выявление U.urealyticum при уретрите считать доказательством причастности микроорганизма к этиологи и заболевания.

М.genitalium первоначально была выделена от больного уретритом. Заражение шимпанзе М.genitalium вызывает у животных уретрит и ведет к образованию специфических антител. У людей, страдающих негонококковыми уретритами, у которых с помощью ПЦР выявлены М.genitalium, весьма часто обнаруживаются с помощью иммуноферментного метода антитела к этому микроорганизму. Представленные данные позволяют утверждать, что М.genitalium действительно вызывает уретрит, часто рецидивирующий.

Уретрит довольно часто осложняется воспалением простаты. В литературе встречается много противоречивых сведений о роли уреаплазм и других генитальных микоплазм в происхождении простатита, тем более что материал из простаты может быть контаминирозан микоплазмами из уретры. Тем не менее в настоящее время появляется уверенность в том, что все геннтальные микоплазмы, в особенности М.genitalium могут вызывать простатит.

Осложнения в виде эпидидимита наиболее часты при гонорее и хламидиозе, а у пожилых мужчин причиной эпидидимита также являются грамотрицательные бактерии. Данные о роли микоплазм в возникновении этого заболевания весьма скудны.

Поскольку у больных негонококковым уретритом, особенно у лиц с НLА В27 локусом гистосовместмости, может развиться синдром Рейтера, высказывались предположения об участии в развитии этого осложнения генитальных микоплазм. Данное положение пока не совсем ясно и требует дальнейших доказательств в виде поиска с помощью ПЦР мпкоплазменпой ДНК в суставах.

Микоплазменные заболевания у женщин

Первым заболеванием, вызванным М.hominis у женщин, был зарегистрирован гнойный бартолинит. Позднее возникли сомнения, так как гнойное отделяемое могло быть контаминировано этим видом микоплазм из влагалища. В настоящее время считают, что М.hominis не является частым возбудителем бартолинита.

Самым распространенным гинекологическим заболеванием, в этиологии которого участвуют М.hominis и U.urealyticum, является бактериальный вагиноз. М.hominis является симбионтом других бактерий, причастных к заболеванию. U.urealyticum несколько реже, чем М.hominis, обнаруживается при бактериальном вагинозе, но количество микробных тел U.urealyticum бывает значительно выше.

При воспалительных заболеваниях органов малого таза генитальные микоплазмы часто находят в ассоциации с анаэробами и хламидиями. Считается, что М.hominis может вызывать самоограничивающийся воспалительный процесс в трубах и периметрии.

Уреаплазмы также находят в составе смешанной микрофлоры при воспалении органов малого таза, однако отсутствие выработки специфических антител не позволяет считать их этиологическую роль подтвержденной. Генитальные микоплазмы могут вызывать послеродовые и послеабортные воспалительные осложнения.

Роль микоплазм в нарушении репродукции

В настоящее время признается возможной роль микоплазм в снижении фертильности мужчин, поскольку в присутствии уреаплазм морфология сперматозоидов изменяется, теряется подвижность у значительной их части. Применение антибиотиков, активных в отношении микоплазм, приводит к нормализации морфологии и подвижности спермиев.

Уреаплазмы чаще, чем при фертильных браках, выделяются из гениталий бесплодных супружеских пар, в том числе и из эндометрия бесплодных женщин. Во всяком случае считается, что уреаплазмы в большей степени влияют на мужскую фертилъность, чем на женскую. Попытки лечения бесплодных пар антибиотиками, активными в отношении уреаплазм, дали противоречивые результаты.

Таким образом, уреаплазмы, хотя и влияют на подвижность сперматозоидов, вряд ли могут считаться причиной мужского бесплодия во всех случаях их присутствия в сперме даже в больших количествах (10⁵ КОЕ/мл).

Много внимания было уделено изучению роли М.hominis и U.urealyticum в возникновении спонтанных абортов, мертворождении и рождении детей с низкой массой тела. Многочисленные опубликованные в печати данные не представляют безупречных доказательств причастности этих микроорганизмов к перечисленным патологическим состояниям. Тем не менее клинические наблюдения свидетельствуют, что лечение тетрациклинами приводит к благоприятным исходам последующих беременностей в достаточно большом проценте случаев.

Лабораторная диагностика

У мужчин материалом для исследования являются мазок из уретры и первая порция мочи. У женщин наиболее часто исследуют вагинальные и цервикальные мазки и первую порцию мочи. Уретральные материалы исследуются реже, так как особенно обильный рост микоплазм происходит при посеве цервикальных и вагинальных выделений.

Чтобы избежать высыхания взятых образцов, тампоны, которыми берут материал, погружают в транспортную среду (в ростовую среду для микоплазм или сахарозо-фосфатный буферный раствор, рН 6,0-6,5).

Наиболее достоверным методом обнаружения микоплазм является культуральный метод. В то же время простота мммунофлюоресцентного метода делает его привлекательным для недостаточно хорошо оснащенных диагностических лабораторий.

Культуральный метод

Для выращивания микоплазм требуется высокое содержание холестерина и предшественников синтеза нуклеиновых кислот. В качестве источника холестерина в питательные среды для микоплазм вводится нативная лошадиная сыворотка в объеме 20%. Субстратом для синтеза нуклеиновых кислот является экстракт из пекарских дрожжей, его вносят в среду в объеме 10%.

В качестве основы питательной среды можно использовать триптическне перевары сердечной мышцы крупного рогатого скота, инфузы из этого же материала, а также триптиказосоевый бульон, настойный бульон из плаценты.

К жидкой части основы добавляют 1% ферментативного пептона (лучше триптона), 0,5% NaCl, устанавливают рН 7,4 для выращивания М.hominis и 6,0 - для U.urealyticum. Для плотных питательных сред добавляют 2% агар-агара. Среды стерилизуют в автоклаве и к стерилизованной среде перед посевом исследуемого материала добавляют лошадиную сыворотку и дрожжевой экстракт. Для подавления бактериальной флоры, содержащейся в биологическом материале, в среду вводят ацетат таллия в конечной концентрации 1:2000 и 1000 Ед/мл пенициллина.

Так как микоплазмы лучше растут в первой генерации в жидких питательных средах, то конструируются жидкие дифференциально диагностические среды: для выделения М.hominis - с добавлением 0,1% l-аргинина, для U.urealyticum - 0,1% мочевины. В эти среды вводят индикатор феноловый красный в концентрации 0,002%, по изменению цвета которого судят о разложении аргинина или мочевины с образованием аммиака и защелачивании среды. Желто-красный цвет среды переходит в лиловый вследствие ферментативной активности растущих микоплазм. Можно использовать серийные разведения исследуемого материала от 10^-2 до 10^-7 в лунках панели или в рядах пробирок для определения концентрации микоплазм в материале.

Рост мнкоплазм в жидких средах необходимо подтвердить высевом на плотные среды, при этом следует учитывать быструю гибель уреаплазм в щелочной среде. Для высева на плотную питательную среду оптимальным является время начала изменения цвета среды. В современных условиях для поддержания рН среды для уреаплазм используется 0,05 М НЕРЕS-буфер.

Рост М.hominis проявляется через 24-48 ч в виде характерных колоний с плотным центром и кружевной периферией - "яичница-глазунья". Невооруженным глазом колонии не видны или плохо различимы. Рост колоний на плотной среде рассматривают при малом увеличении микроскопа (хбО).

Для U.urealyticum характерно образование на агaре очень мелких колоний и часто их сливной рост. Для лучшей их визуализации к плотной среде добавляют мочевину и индикатор ее разложения тиосульфат марганца. Колонии U.urealyticum окрашиваются на этой среде в коричневый цвет.

Определение антигенов мнкоплазм, то есть выявление определенных серотипов при подтверждении видовой принадлежности выделенной культуры, в обычной практике не производится, хотя возможно путем эпифлюоресценции, то есть нанесения специфических люминесцирующих антител на поверхность плотной питательной соеды и просмотр под малым увеличением в люминесцентном микроскопе.

Другие методы определения М.hominis и U.urealyticum несут возможность гипердиагностики, а также неспецифических реакций. Применение прямой иммуиофлюоресценции путем "окрашивания" препарата из выделений на предметном стекле с помощью специфических флюоресцирующих антител нередко, особенно в руках неопытного мнкроскописта, чревато регистрацией неспецифического свечения слизи, лейкоцитов, других элементов распада клеток как признака присутствия микоплазм.

Молекулярно-биологические методы, в частности ПЦР, в силу их очень высокой чувствительности дают положительный результат даже при минимальном содержании микоплазм в исследуемом материале. Учитывая частое присутствие микоплазм (М.hominis и U.urealyticum) в нормальном биоценозе урогеннталий, оценка результатов ПЦР должна быть осторожной.

Для М.genitalium единственным широко применяемым методом диагностики является ПЦР, так как их культивирование остается весьма затруднительным.

Серологические методы диагностики микоплазменных поражений с помощью определения специфических антител в сыворотке крови также не нашли широкого применения в практических лабораториях, хотя в научно-исследовательских целях они используются (реакции торможения роста мнкоплазм, реакции торможения метаболизма микоплазм, иммуноферментный анализ и др.).

Содержание

Урогенитальные инфекции

Нормальная микрофлора уретры и влагалища

Бактериальный вагиноз

Генитальный кандидоз

Урогенитальный хламидиоз

Генитальные микоплазмы

Гонорея

Урогенитальный трихомоноз

Генитальный герпес

Папилломавирусная инфекция