kub
Островок  здоровья

----
  
записная книжка врача акушера-гинеколога Маркун Татьяны Андреевны
----
 
 
 

Папилломавирусная инфекция

Большая группа папилломавирусов стала эффективно изучаться сравнительно недавно. Побудительная причина интенсивного изучения этих вирусов связана с тем, что некоторые из них ассоциируются с возникновением злокачественных опухолей аногенитальной области. Среди опухолей генитальной локализации особое место занимает рак шейки матки, вирусная этиология которого доказана целым рядом эпидемиологических исследований и подтверждена присутствием в ткани опухоли ДНК определенных типов вирусов папилломы человека (ВПЧ).

ВПЧ - мелкие ДНК-содержащие вирусы, характерная особенность которых заключается в способности вызывать пролиферацию эпителия кожи и/или слизистых оболочек. ВПЧ не размножаются в культуре клеток, поэтому сведения о биологии вирусов получены с помощью молекулярно-генетических технологий и эпидемиологических исследований. Показано существование 100 типов, отличающихся по строению ДНК, 75 из них молекулярно клонированы и полностью секвенированы. Типирование ВПЧ основано не на антигенных различиях, а на ДНК-гомологии.

Среди 30 типов ВПЧ, которые поражают аногенитальную область, различают типы высокого и низкого онкогенного риска. ВПЧ обнаруживают в 93% случаев инвазивного рака аногениталий, при этом 50% из них - ВПЧ 16.

Установлен половой путь передачи ВПЧ. Вследствие частого бессимптомного пребывания ВПЧ в организме инфицированные люди зачастую не знают о том, что они инфицированы. Недавно появившиеся генитальные бородавки более инфекционны, чем давно существующие.

Резкое снижение иммунитета, наблюдаемое при СПИДе, при лечении цитотоксическими препаратами, сопровождается реактивацией латентной папплломавирусной инфекции, что клинически проявляется в виде образования множественных папилломатозных разрастании.

Как происходит репликация вируса, сборка вирусных частиц и их высвобождение из клетки, считать полностью установленными еще нельзя. Известны 2 способа репликации - постоянная репликация эписомного генома в базалыюм слое эпителия и вегетативная репликация в более дифференцированных клетках гранулярного слоя. Репликация эписомного генома происходит постоянно, но количество копий ДНК низкое. Вегетативная репликация происходит в ядрах клеток, где генерируется потомство ВПЧ. Высвобождение вирусных частиц происходит в результате дегенерации десквамированных клеток.

По мере изучения ВПЧ гибридизационными методами расширяется круг вирусов высокого онкогенного риска. Это ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68. Вирусами низкого онкогенного риска остаются 5 типов ВПЧ - 6, 11, 42, 43, 44. ВПЧ 16 наиболее часто встречается в ткани плоскоклеточного рака шейки матки, ВПЧ 18 - в ткани железистого рака - аденокарциномы.

В табл. 6.7 приведены типы ВПЧ, обнаруживаемые при различных поражениях кожи и слизистых оболочек.

Типы ВПЧ, обнаруженные при различных поражениях кожи и слизистых оболочек
(Villiers Е. М., 1989)

Клинические проявления ВПЧ типы
Кожные поражения
Подошвенные бородавки1, 2, 4
Обычные бородавки2, 4, 26, 27, 29, 57
Плоские бородавки3, 10, 28, 49
Бородавки Бютчера7
Бородавчатая эпидермодисплазия5, 8, 9, 10, 12, 15, 19, 36
Небородавчатые кожные поражения37, 38
Поражения слизистых гениталий
Condylomata accuminata6, 11, 42-44, 54
Некондиломатозные поражения6, 11, 16, 18, 30, 31, 33, 34, 35, 39, 40, 42, 43, 51, 52, 55, 56, 57-59, 61, 64, 67-70
Карцинома16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 54, 56, 66, 68
Поражения слизистых оболочек не гениталий
Папиллома гортани6, 11, 30
Карцинома языка2, 6, 11, 16, 18, 30

Применение методов определения ДНК ВПЧ повышает эффективность выявления предраковых состояний, во-первых, потому, что чувствительность методов чрезвычайно высока, их предсказательный уровень неизмеримо выше, чем цитологического метода; во-вторых, стандартизация молекулярно-биологическпх методов достижима, в то время как цитологические исследования с трудом можно привести к одному стандарту.

Комбинированное обследование пациентов цитологическими и молекулярно-биологическимн методами позволяет выявить интраэпителиальную неоплазию и наличие ВПЧ высокого и низкого онкогенного риска. В лабораторной диагностике ВПЧ-инфекций применяют исключительно молекулярно-биологические методы. Существует три основных категории определения ДНК ВПЧ: неамплификационные, амплификационные и сигнальные амплификационные.

Неамплификационные методы в обычной диагностической практике в настоящее время не применяются, они используются в научных целях.

В табл.6.8 приводятся основные молекулярно-биологические методы, используемые для определения ДНК ВПЧ.

Методы обнаружения ДНК ВПЧ

Категория методовНазвания методов
НеамплификационныеДот-блот, саузерн-блот гибридизация, гибридизация in situ
АмплификационныеПолимеразная цепная реакция - ПЦР
Лигазнля цепная реакция - ЛЦР
Сигнальные амплификацнонныеСистема гибридной ловушки - "Digene Hybrid Capture System II"

Амплификационные методы, целью которых является выявление характерных для типа ВПЧ олигонуклеотидов в исследуемом материале и умножение их количества с помощью ПЦР или ЛЦР, называют амплификацией мишени. В мире используется несколько стандартных реактивов для всех типов ВПЧ, в нашей стране практически используются праймеры лабораторного приготовления.

Не останавливаясь подробно на мишень-амплифицирующих методах, обратимся к сигнальным амплификационным методам, которые не требуют ограничений в лабораторной практике, характерных для ПЦР-лабораторий.

Система двойной генной ловушки - "Hybrid Capture II" фирмы Abbott (США), применяется без тех ограничений, которые необходимы при использовании ПЦР. Она обеспечивает:

  • компьютерную интерпретацию результатов, что исключает субъективизм в оценке;
  • воспроизводимость и достоверность результатов;
  • полный цикл исследования за один день.

Система "Digene Hybrid Capture II" использует РНК-ДНК гибридизацию в растворе с последующей "хвостовой" иммунологнческой реакцией между гибридом РНК пробы - ДНК мишени и специфическими антителами к этому гибриду. Тест обязан своей высокой специфичностью нескольким независимым составляющим.

Во-первых, мишенью является весь геном ВПЧ. Длинная одноцепочечная РНК эффективно гибридизируется со всеми 8000 нуклеотидов ДНК ВПЧ. Гибрид ДНК-РНК более стабилен, что позволяет избежать нежелательных побочных реакций.

Во-вторых, источником дополнительной чувствительности реакции является использование антител к РНК-ДНК гибриду, конъюгированных с множеством молекул щелочной фосфатазы. Эти меченые антитела распознают короткие цепочки РНК-ДНК гибрида способом, который не имеет отношения к последовательностям нуклеотидов ДНК и РНК. Тысячи молекул антител могут покрыть единичный геномный гибрид ДНК ВПЧ.

В-третьих, каждый иммобилизованный энзим щелочной фосфатазы реагирует с множеством молекул хемилюминесцента диоксетана за 1 минуту и вызывает постоянный поток фотонов, которые подсчитываются фотомультиплейерной трубкой люминометра.

В-четвертых, система генной ловушки имеет преимущество перед естественной амплификацией, так как вовлекает большой объем (10-20%) клинического материала в реакцию.

В гибридной ловушке используются РНК-пробы, комплементарные к полной геномной последовательности 13 канцерогенных и 5 типов ВПЧ низкого онкогенного риска. Составляются "коктейли" высокого и низкого риска соответственно. Каждый "коктейль" отдельно инкубируется с денатурированной (одноцепочечной) ДНК из клинического материала. Образующимся РНК-ДНК гибрид переносится в лунки микропанели, на которых иммобилизованы моноклональные антитела к РНК-ДНК гибриду. Антитела специфически распознают гибрид, который прикрепляется к лунке панели. Уловленные таким образом РНК-ДНК гибриды затем вступают в реакцию с моноклональными антителами к гибриду, меченными щелочной фосфатазой, вносимыми в каждую лунку. Избыток антител и негибридизированных молекул удаляют промыванием. В лунки добавляют люминесцирующий субстрат диоксетан. Если субстрат разрушается щелочной фосфатазой, то происходит испускание света. Эмиссию света можно измерить с помощью люминометра. Количество света генерируется в пропорции к числу мишеней ДНК в образце.

Аналитическая чувствительность системы - 0,2 пг/мл (1000 копий генома ВПЧ).

Определение ВПЧ с использованием "Digene Hybrid Capture II" служит эффективным дополнением к цервикальной цитологии и может помочь снизить заболеваемость и смертность от цервикального рака.

Содержание

Урогенитальные инфекции
Нормальная микрофлора уретры и влагалища
Бактериальный вагиноз
Генитальный кандидоз
Урогенитальный хламидиоз
Генитальные микоплазмы
Гонорея
Урогенитальный трихомоноз
Генитальный герпес
Папилломавирусная инфекция



 
 

Куда пойти учиться



 

Виртуальные консультации

На нашем форуме вы можете задать вопросы о проблемах своего здоровья, получить поддержку и бесплатную профессиональную рекомендацию специалиста, найти новых знакомых и поговорить на волнующие вас темы. Это позволит вам сделать собственный выбор на основании полученных фактов.

Медицинский форум КОМПАС ЗДОРОВЬЯ

Обратите внимание! Диагностика и лечение виртуально не проводятся! Обсуждаются только возможные пути сохранения вашего здоровья.

Подробнее см. Правила форума  

Последние сообщения



Реальные консультации


Реальный консультативный прием ограничен.

Ранее обращавшиеся пациенты могут найти меня по известным им реквизитам.

Заметки на полях


навязывание услуг компании Билайн, воровство компании Билайн

Нажми на картинку -
узнай подробности!

Новости сайта

Ссылки на внешние страницы

20.05.12

Уважаемые пользователи!

Просьба сообщать о неработающих ссылках на внешние страницы, включая ссылки, не выводящие прямо на нужный материал, запрашивающие оплату, требующие личные данные и т.д. Для оперативности вы можете сделать это через форму отзыва, размещенную на каждой странице.
Ссылки будут заменены на рабочие или удалены.

Тема от 05.09.08 актуальна!

Остался неоцифрованным 3-й том МКБ. Желающие оказать помощь могут заявить об этом на нашем форуме

05.09.08
В настоящее время на сайте готовится полная HTML-версия МКБ-10 - Международной классификации болезней, 10-я редакция.

Желающие принять участие могут заявить об этом на нашем форуме

25.04.08
Уведомления об изменениях на сайте можно получить через раздел форума "Компас здоровья" - Библиотека сайта "Островок здоровья"

Островок здоровья

 
----
Чтобы сообщить об ошибке на данной странице, выделите текст мышью и нажмите Ctrl+Enter.
Выделенный текст будет отправлен редактору сайта.
----
 
Информация, представленная на данном сайте, предназначена исключительно для образовательных и научных целей,
не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения, и не может служить заменой очной консультации врача.
Администрация сайта не несёт ответственности за результаты, полученные в ходе самолечения с использованием справочного материала сайта
Перепечатка материалов сайта разрешается при условии размещения активной ссылки на оригинальный материал.
© 2008 blizzard. Все права защищены и охраняются законом.



 
----