МЕНЕЕ ИММУНОГЕННЫЕ АНТИГЕНЫ ЭРИТРОЦИТОВ

Фенотипирование эритроцитов по антигенам К и с

Наиболее выраженными антигенными свойствами среди минорных антигенов эритроцитов обладают факторы Келл (К) и с (система Резус). Фактор Келл стоит на втором месте после фактора D в шкале трансфузионно опасных антигенов эритроцитов. Третье место занимает фактор с.

Индекс сенсибилизации населения (процент лиц с повышенным риском посттрансфузионного осложнения) к обоим указанным факторам в настоящее время высок.

По данным С. И. Донскова (1996), сенсибилизационный индекс населения в отношении фактора К составляет условно 18% (9% "первичных" реципиентов + и 9% "первичных" беременных) на каждый расчетный год.

В абсолютных цифрах сенсибилизационный индекс по антигену К системы Келл с учетом 10 предшествующих лет составляет по расчетным данным 8-10 млн человек, то есть примерно 6-7% всех потенциальных реципиентов на данную точку отсчета.

С тем, чтобы избежать посттрансфузионные осложнения по антигену К, необходимо выдавать в лечебно-профилактические учреждения только К-отрицательные эритроциты. В кабинетах, отделениях и станциях переливания крови целесообразно производить определение антигена К, как обязательное, у всех доноров наряду с группой и резус-фактором, после чего отбирать К-положительные образцы крови, не допуская их к выдаче для переливания. К-положительным донорам целесообразно рекомендовать другой вид донорства (плазмы, тромбоцитов, лейкоцитов и др.), но не эритроцитов.

Определение антигена К в эритроцитах производят с помощью общепринятых методов исследования:

1. Непрямая реакция Кумбса.
2. Желатиновый метод в пробирках.
3. Экспресс-метод на плоскости с сывороткой анти-К универсальной ("Гемостандарт", Москва).

Для исследования экспресс-методом используют свежие (не более двух дней хранения), неотмытые или отмытые эритроциты, взятые со дна пробирки после отстаивания от сыворотки (3-я фракция крови), плазмы с консервантом или физиологического раствора. Используют также цельную кровь, взятую из прокола пальца непосредственно перед исследованием.

Ход определения:

• на плоскость помещают две капли (1 мл) сыворотки анти-К и каплю эритроцитов в количестве 1/3 объема взятой сыворотки;
• капли перемешивают стеклянной палочкой и при плавном периодическом покачивании пластинки наблюдают за ходом реакции в течение 5 мин.

При положительном результате агглютинация эритроцитов появляется к 30 с - 1 мин и в дальнейшем усиливается, при отрицательном результате агглютинация отсутствует. По истечении 3-4 мин в реагирующую смесь добавляют 1-2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов и продолжают наблюдение до истечения 5 мин, после чего регистрируют результат.

Распространенность антигена с (система резус) составляет около 80%. Около 20% людей не содержат антигена с и являются гомозиготными по аллельному антигену С. Соответственно, этим пациентам в 80% случаев переливают эритроциты, содержащие антиген с, что ведет к сенсибилизации и риску развития посттрансфузионного осложнения. Индекс сенсибилизации населения к антигену с составляет около 32%.

С тем, чтобы уменьшить индекс сенсибилизации населения и избежать посттрансфузионных осложнений, обусловленных несовместимостью по этому антигену, целесообразно у каждого резус-положительного реципиента определять с антиген и при его отсутствии переливать реципиенту кровь доноров, гомозиготных по антигену С, т.е. с-отрицательных. На станциях и в отделениях переливания крови целесообразно иметь резервную группу таких доноров или запас с-отрицательной эритроцитной массы.

Антиген с определяют со стандартной сывороткой анти-с ("Гемостандарт", Москва) теми же методами, что и антиген D. Для выявления антигена С целесообразно использовать Цоликлон "Анти-С-супер" (моноклональные анти-С-антитела) ("Гематолог", Москва). Цоликлон "Анти-С-супер" не содержит антител других специфичностей и не требует проведения контроля растворителя.

Фенотипирование эритроцитов по антигенам системы Lewis

Выявление Lewis-антигенов Lе^а, Lе^b ферментным методом с использованием неполных стандартных антител анти-Lе(а), анти-Lе(L) ("Гемостандарт", Москва) состоит из приготовления рабочего ферментного раствора, обработки (энзимирования) этим раствором исследуемых и стандартных (контрольных) эритроцитов и постановки реакции агглютинации энзимированных эритроцитов.

Ход определения:

1. Приготовление рабочего ферментного раствора.

   Для приготовления рабочего ферментного раствора обычно используют протеазу-С (комплекс протеаз, продуцируемых культурой Arc. chrysogenum).

   Возможно также использование любой другой серологически активной протеазы микробного (субтилизин, проназа) или растительного (папаин, бромелин) происхождения.

   Необходимый объем 0,1% ферментного раствора готовят путем растворения в течение нескольких минут при комнатной температуре навески используемого ферментного препарата в физиологическом растворе (например, 10 мг фермента растворяют в 10 мл физраствора). Раствор микробных протеаз готов для использования сразу же после растворения фермента. Для развития ферментативной активности раствора папаина его выдерживают 1 ч при комнатной температуре после растворения препарата. Годность приготовленного раствора микробной протеазы (протеазы-С), сохраняемой при 4-8°С,- 1 неделя, раствора папаина - 48 ч. Порошкообразные ферментные препараты при 4-8°С сохраняют свою активность в течение нескольких лет.

2. Энзимирование эритроцитов:
   • исследуемые и стандартные (Lе^а+b-, Lе^а-b+) эритроциты дважды отмывают физраствором;
   • к 1 объему осадка отмытых эритроцитов добавляют 5 объемов ферментного раствора (например, к 3 каплям эритроцитов добавляют 15 капель ферментного раствора);
   • эритроциты и ферментный раствор перемешивают;
   • пробирки с ингредиентами помещают в суховоздушный термостат с температурой 37°С на 45 мин или на 30 мин в водяную баню с той же температурой;
   • после энзимирования эритроциты дважды отмывают от ферментного раствора;
   • готовят 5-7,5% рабочую взвесь энзимированных эритроцитов в физиологическом растворе.

3. Постановка реакции агглютинации энзимированных эритроцитов:
   • для каждого образца исследуемых и стандартных (контрольных) эритроцитов на плоскость помещают по 1 капле сыворотки анти-Lе(а) и анти-Lе(L);
   • к помещенным на плоскость реагентам добавляют по 1 капле энзимированных эритроцитов;
   • реагенты перемешивают;
   • инкубируют (в покое) 10 мин при комнатной температуре;
   • учитывают результаты реакции агглютинации энзимированных эритроцитов невооруженным глазом или с помощью 4-кратной лупы (при хорошем естественном или достаточном искусственном освещении, при осторожном покачивании плоскости) - по наличию или отсутствию агглютинации.

Результат учитывается как истинный после проверки контрольных проб, то есть при наличии агглютинации с положительным контролем и ее отсутствии с отрицательным контролем.

Распространенность фенотипов системы Lewis у доноров на северо-западе России: Lе^а-b- - 20%, Lе^а+b- - 3-5%, Lе^а-b+ 70%, Lea^а+b+ - встречается редко.

Страница 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

всего страниц: 10

ЛИТЕРАТУРА [показать] .

Источник: Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001